摘要：
双硫仑：是一种广泛用于治疗慢性酒精上瘾以及古柯碱的戒断药物，其为二硫代氨基甲酸盐，水溶性极差。早在20世纪中期，Jacobsen等发现双硫仑可有效抑制乙醛脱氢酶的活性，造成乙醛的饱和氧化反应，其本身和代谢产物可引起体内相关蛋白失活，使人体产生不适反应，从而达到抗酗酒目的。
二乙基二硫代氨基甲酸钠(diethyldithiocarbamate，DDTC)：白色至无色片状结晶，有吸湿性，易溶于水，溶于乙醇、甲醇、丙酮，不溶于乙醚和苯。水溶液呈碱性并逐渐分解，遇酸能分离出二硫化碳而使溶液混浊，熔点94-102℃。最大吸收波长(乙醇中)257、290nm(摩尔吸光系数1200、13000)。低毒，半数致死量(大鼠，经口)2830mg/kg。研究显示，双硫仑在进入人体后会迅速转化为体内代谢物DDTC，Cu可与DDTC结合形成较稳定的DDTC-Cu复合物。
背景：研究表明双硫仑本身具有抗肿瘤活性，可联合铜(Cu)离子在体内外水平对多种肿瘤发挥抑癌作用，但关于双硫仑对骨肉瘤细胞增殖和凋亡作用的影响尚未阐明。
目的：探讨双硫仑-Cu在体内外水平对骨肉瘤增殖与凋亡能力的影响以及可能的作用机制。
方法：实验方案经山西医科大学动物实验伦理委员会批准(批准号为2017LL077)。①体外实验：配置双硫仑在进入人体后的转换物二乙基二硫代氨基甲酸钠(diethyldithiocarbamate，DDTC)和Cu离子的复合物DDTC-Cu(0.5，1，2，3和5μmol/L)，设置DDTC单药(5μmol/L)、Cu单药(5μmol/L)和空白对照组。药物处理人骨肉瘤细胞Saos-2细胞和MG-63细胞，CCK8法检测不同浓度DDTC-Cu对Saos-2细胞和MG-63细胞的增殖抑制作用；采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测DDTC-Cu对Saos-2细胞凋亡水平变化；②体内实验：取4周龄BALB/c-nu/nu雌性裸鼠共10只，随机分为DDTC-Cu组和对照组。采用异位移植方法，在裸鼠右侧背部皮下注射Saos-2细胞和Matrigel混悬液(1∶1混合)，注射量400μL/只；接种2周后，对照组裸鼠腹腔注射地塞米松(0.5mg/kg，隔日1次)，DDTC-Cu组裸鼠腹腔注射地塞米松(0.5mg/kg，隔日1次)和DDTC-Cu复合物(10nmol/g，隔日1次)；观察两组荷瘤小鼠移植瘤生长情况，绘制瘤体生长曲线。接种5周后麻醉下处死动物，完整取出瘤体，免疫组织化学检测瘤体石蜡切片组织中ki67蛋白的表达水平，Westernblot检测瘤体组织中细胞增殖和凋亡蛋白的表达及JNK通路蛋白表达的变化。
结果与结论：①体外实验结果：DDTC-Cu组对骨肉瘤细胞的增殖抑制作用明显高于其他3组；CCK-8实验结果显示DDTC-Cu对骨肉瘤细胞增殖抑制呈剂量依赖性，两株细胞的24h药物半抑制浓度分别为0.337μmol/L和0.487μmol/L；流式细胞学检测结果显示DDTC-Cu可呈剂量依赖性促进Saos-2细胞的凋亡；②体内实验结果：DDTC-Cu组裸鼠移植瘤的体积和质量均小于对照组；免疫组织化学结果显示，DDTC-Cu组的瘤体中ki-67蛋白表达水平较对照组降低；Westernblot检测结果显示，DDTC-Cu组瘤体蛋白中p-JNK和c-jun的表达水平均上调。结果提示，双硫仑联合Cu离子在体内外水平抑制人骨肉瘤细胞增殖并促进骨肉瘤细胞凋亡，其作用机制可能与JNK通路活化有关。
ORCID:-901X(徐朝健)
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
关键词:双硫仑,铜,骨肉瘤,增殖,凋亡,JNK通路
